申请号:CN202111363429.3

专利名称:一种哈维弧菌345基因敲除株及其应用

申请日期:2021-11-17

专利类型:发明授权

申请(权利)人:中国水产科学研究院南海水产研究所

发明人:邓益琴; 司徒洁金; 冯娟; 陈皓祥

公开(公告)号:CN114214436B

公开(公告)日期:2024-06-11

摘要:本发明公开了基于定量PCR技术评价细菌接合转移效率的方法，属于细菌分子生物技术领域。本发明通过PCR扩增和无缝克隆构建含有受体菌同源序列的自杀质粒；并通过转化方式将其导入供体菌大肠杆菌；接着通过供体菌与受体菌的接合作用，将自杀质粒送入受体菌内，并与受体菌染色体上的同源序列发生同源重组，自杀质粒整合进入受体细胞；根据同源重组后的染色体序列，设计上游引物序列在受体菌染色体上、下游引物序列在质粒上的特异性检测引物，定量PCR的方式定量接合子数量，同时设计相对于供体菌的受体菌的特异性引物，定量受体菌总数量；最后，通过公式：接合效率＝接合子数量÷受体菌总量，得到接合效率。